酸性磷酸酯酶動(dòng)力學(xué)性質(zhì)分析

米氏常數(shù)（Km）和最大反應(yīng)速度（Vm）的測(cè)定

[原理]

在溫度、pH及酶濃度恒定的條件下，底物濃度對(duì)酶促反應(yīng)的速度有很大的影響。在底物濃度很低時(shí)，酶促反應(yīng)的速度（v）隨底物濃度的增加而迅速增加；隨著底物濃度的繼續(xù)增加，反應(yīng)速度的增加開(kāi)始減慢；當(dāng)?shù)孜餄舛仍黾拥侥撤N程度時(shí)，反應(yīng)速度達(dá)到一個(gè)極限值（Vmax）。

底物濃度與反應(yīng)速度的這種關(guān)系可用Michaelis-Menten方程式表示：

式中

v——反應(yīng)速度；

Km——米氏常數(shù)；

Vmax——大畢酶反應(yīng)最大速度；

[S] ——底物濃度。

從米氏方程式可見(jiàn)：米氏常滾敏芹數(shù)Km等于反應(yīng)速度達(dá)到最大反應(yīng)速度一半時(shí)的底物濃度，米氏常數(shù)的單位就是濃度單位(mol/L或mmol/L)。

在酶學(xué)分析中，Km是酶的一個(gè)基本特征常數(shù)，它包含著酶與底物結(jié)合和解離的性質(zhì)。Km與底物濃度、酶濃度無(wú)關(guān)，與pH、溫度、離子強(qiáng)度等因素有關(guān)。對(duì)于每一個(gè)酶促反應(yīng)，在一定條件下都有其特定的Km值，因此可用于鑒別酶。

測(cè)拿高定Km、Vmax，一般用作圖法求得。作圖法有很多，最常用的是Linewaver-Burk作圖法，該法是根據(jù)米氏方程的倒數(shù)形式，以1/v對(duì)1/[S]作圖，可得到一條直線。直線在橫軸上的截距為 -1/Km，縱截距為1/Vmax，可求出Km與Vmax。

米氏常數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)有:

1. 取樣量一定要準(zhǔn)確。 2. 反應(yīng)時(shí)間一定要準(zhǔn)確。 3. 加酶前后,試劑要混勻。 4. 參比要先加NaOH,后加酶